Las semillas pueden ser un importante vehículo de transmisión de virus debido a su comercio internacional y al intercambio de germoplasma en programas de mejora. Además, pueden servir de puente entre ciclos de cultivo que faciliten la supervivencia del virus. Se han descrito hasta 231 enfermedades causadas por virus que se pueden transmitir por semilla (Sastry, 2013). 

Para la detección de virus en semilla los organismos oficiales disponen de protocolos de referencia que se basan  principalmente en el uso de la técnica ELISA, uno de cuyos inconvenientes es que es necesario analizar un gran número de semillas por lote debido a que su sensibilidad es inferior a la de otras técnicas y puede dar lugar a resultados erróneos dado que la concentración de virus en la semilla suele ser inferior a la observada en otros tejidos vegetales (Zhang et al., 2011). Por esta razón es necesario mejorar las técnicas de detección de virus en semilla que permitan una mayor sensibilidad. En Abiopep hemos desarrollado y puesto a punto la PCR a tiempo real (RT-qPCR) basada en el uso de sondas TaqMan para la detección de tres virus de cucurbitáceas en semillas, el virus del mosaico verde jaspeado del pepino (Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV), el virus de las manchas necróticas del melón (Melon necrotic spot virus, MNSV) y el virus del mosaico de la calabaza (Squash mosaic virus, SqMV) (Torre et al., 2019). Esta técnica es específica y más sensible que el ELISA.

La RT-qPCT con sondas TaqMan es un método robusto y eficaz para el diagnóstico de virus en semillas, permite reducir el número de submuestras a analizar por lote, los materiales y el tiempo, abaratando los costes del análisis.

Nuestro método de RT-qPCR ha demostrado ser muy adecuado para el análisis de lotes de semillas, y la posibilidad de implementarlo en ensayos oficiales de certificación deber ser considerada. 

En Abiopep disponemos también de un set de diagnóstico basado en sondas TaqMan para la detección del virus del rizado de la hoja de Nueva Delhi (Tomato leaf curl New Delhi virus, ToLDNDV), un virus que afecta tanto a tomate como cucurbitáceas y que podría transmitirse por semilla (Kil et al., 2020).

Kil, E. J., Bich Vo, T. T., Fadhila, C., Thi Ho, P., Lal, A., Troiano, E., Parrella, G. y Lee, S. (2020) «Seed transmission of tomato leaf curl new delhi virus from zucchini squash in italy», Plants, 9(5), pp. 5-11. doi: 10.3390/plants9050563.

Sastry, K. S. (2013) Seed-borne plant virus diseases, Seed-borne plant virus diseases. India: Springer India. doi: 10.1007/978-81-322-0813-6.

Torre, C., Agüero, J., Gómez-Aix, C. y Aranda, M. A. (2019) «Comparison of DAS-ELISA and qRT-PCR for the detection of cucurbit viruses in seeds», Annals of Applied Biology, 176(2). doi: 10.1111/aab.12543.

Zhang, Y., Zhao, W., Li, M., Chen, H., Zhu, S. y Fan, Z. (2011) «Real-time TaqMan RT-PCR for detection of maize chlorotic mottle virus in maize seeds», Journal of Virological Methods, 171(1), pp. 292-294. doi: 10.1016/j.jviromet.2010.11.002.